细胞污染的分类、来源及预防污染的措施

细胞污染是细胞培养的大敌，预防和避免污染是细胞培养成功的关键。一旦轻敌就会前功尽弃，不仅浪费时间，而且浪费人力、物力，甚至造成无法弥补的损失。

第一步：认识细胞培养过程中有哪些污染？

细胞培养污染是指培养环境中侵入了对细胞生存有害的成分和造成细胞变异的异物。体外细胞培养污染可分为三类：物理性、化学性及生物性污染。

物理性污染

物理性污染通过影响细胞培养体系中的生化成分，从而影响细胞的代谢。

物理性污染的来源：培养环境中的物理因素，如温度、放射线、振动、辐射（紫外线或荧光）会对细胞产生影响。

物理性污染的现象：细胞、培养液或其他培养试剂暴露在放射线、辐射或过冷过热的温度中，可以引起细胞代谢发生改变，如细胞同步化、细胞生长受抑制，甚至细胞死亡。

化学性污染

化学性污染是一些对细胞有毒性的或对细胞产生刺激的化学物质。

化学性污染的来源：未纯化的物质、试剂、水、血清、生长辅助因子及储存试剂的容器都可能成为化学性污染的来源。细胞培养的必需养分（如氨基酸）若浓度超过了合理的范围，也会对细胞产生毒性。同样，不同细胞系在最佳培养条件下对血清和缓冲液的要求是不一样的，在培养中应严格控制。

化学性污染的现象：化学性污染同样会使细胞生长受抑制，甚至细胞死亡。

生物性污染

生物性污染包括比较容易发现的细菌、霉菌和酵母的污染，和较难发现的病毒、支原体和其他细胞的污染。

生物性污染的来源：

● 取材不慎或处理不当

● 空气尘埃

● 消毒不严

● 操作不当

● 试剂尤其是血清污染

生物性污染的现象：

● 细菌：G+菌较多。

● 真菌：霉菌较多。

● 支原体：不易检测。

● 病毒：由于病毒有种属特异性，所以病毒污染的概率比较小。

第二步：做好预防污染措施

针对细胞污染的三个分类，做好如下预防措施：

A.物理性污染的预防

● 实验室的合理设计及建立规范的操作规程；

● 培养箱应放在恒温的环境中；

● 培养液及试剂应放在固定位置，而且要注意避光，试剂周围不能放置同位素；

● 从冰箱中取出的培养液应在室温条件中放置一段时间后再进行使用，以避免过冷的温度对细胞的影响。

B.化学性污染的预防

● 使用的所有物质都应是高纯度的，同时正确配制和储存培养液及试剂。

● 在配制液体和清洗容器时必须使用不含杂质的超纯水。

● 选用同一批次的血清。

● 在选用器皿时，根据被培养细胞的生长特性、培养方式和所用培养液的性质来选用适合的器皿来达到实验的准确性和可靠性。

C.生物性污染的预防

● 建立规范的无菌操作程序及各种规章制度，并严格执行。

● 控制环境污染，同时注意实验人员的防护及无菌服的洁净和无菌。

● 保证细胞培养基和器材无菌。

● 在细胞培养基中加入适量的抗生素。

预防是防止细胞培养过程中发生污染的最好办法。只有提前做好预防工作，才能将发生

污染的可能性降到最小程度。